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1975年，湖北省凤凰山168号西汉初期墓中出土了一支毛笔，笔管为竹质，笔毛已朽。相比秦代的毛笔，笔管更长，笔头直径也稍大。这些改进，与汉代书法有着密切联系。在汉代，隶书由秦代的始起而趋于成熟，小篆则相应趋于守势，为适应汉代隶书字迹较大的特点，书写时张弛流放的气势，毛笔笔管的长度、笔头的直径也需要适度增加。
从制造工艺上看，汉代毛笔的笔头除了用兔毛、羊毛外，还出现了将狼毛、鹿毛、狸毛混合制成的“兼毫笔”。“兼毫笔”的笔头多以兔毫为笔柱，羊毛裹在兔毫的外面，使毛笔的特性因混合比例不同而形成差异，满足了不同书写者的需要。
东汉、魏晋时期，毛笔的制作技术逐渐趋于成熟，创造了披柱法，诞生了我国历史上最早记载毛笔制作工艺的文献：王羲之的《笔经》和贾思勰的《齐民要术》。这两部文献里，都记载了披柱法的制作方法。已出土的东汉时期的毛笔实物，也证明了文献记载的准确性，笔头外覆狼毫披毛，笔芯及锋由兔箭毛制成。披柱法的创始，是毛笔制作工艺的重大改革。
当时，各种书体的兴起，这与毛笔制作工艺的改革和质量的提高有着紧密联系。王羲之的书法多为行草书，以韵见长；而柳公权书法多为楷书，以法见长，瘦劲工整。草书、行书择笔的标准比较宽松，楷、篆、隶等择笔要求则较严苛。这一时期，人们习惯跪坐在矮几前悬肘书写，因此笔管部分逐渐变短，笔锋的弹性也得到加强，以“鼠须笔”、“紫毫笔”为代表的短杆笔深受文人的喜爱。著名的《兰亭序》就是王羲之用松鼠尾毫制成的“鼠须笔”所作。
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